• <menu id="4444i"></menu>

    IHC

    您现在的位置:首页 - 技术中心 - 实验方法 - IHC

    Abcam抗体保存指南

    本指南以abcam抗体保存方法为主,同样也可以应用到其他绝大部分公司的抗体产品!请不时核查抗体数据表以获取特定保存建议。

     保存温度和条件

    对于很多抗体而言,分装成小等份并冻存于-20℃或-80℃是最佳保存条件。分装成小等份可最大程度减少由冻融造成的损伤,以及从单个试剂瓶中多次吸取而引入的污染。小等份只需冻融一次,如有剩余,可将剩余物保存于4℃。在收到抗体时,在10000×g下离心20秒以沉积截留于试剂瓶螺纹的溶液,并以小等份转移至低蛋白结合微量离心管中。小等份的量取决于实验人员在实验中通常采用的量。小等份应不小于10μl;等份越小,储液浓度因抗体蒸发及吸附于保存瓶表面而受到的影响越大。

    在大多数情况下,收到抗体时在4℃下保存一至两周,然后再冷冻进行长期保存是可以接受的,但也许腹水液是例外,它可能包含蛋白酶,因而应该尽快冻存。同样,遵照数据表上的建议是重要的。

    其他特别条件

    • 酶偶联抗体不应冻存,而应保存于4℃。冻融不仅影响抗体结合能力,还会降低酶活性。
    • 无论偶联至荧光染料、酶还是生物素,偶联抗体都应保存于深色试剂瓶中或用金属箔包裹。暴露于光线中将损害偶联物的活性。特别是荧光偶联物易受到光漂白影响,在实验的所有阶段都应避光。
    • IgG3同型抗体具有解冻时形成聚集物的独特趋势,应始终保存于4℃。

     

    用叠氮化钠防止污染

    为了防止微生物污染,可将叠氮化钠加入抗体制备品中达到0.02%(w/v)的终浓度。很多abcam抗体已经包含这种防腐剂,所用浓度范围为0.02至0.05%。

    不使用叠氮化钠的情形:

    • 如果用抗体染色或处理活细胞,或如果用抗体进行体内研究,一定要使用不包含叠氮化钠的制备品。该抗菌剂也对大多数其它生物具有毒性:它阻断细胞色素电子传递系统。
    • 叠氮化钠会干扰氨基参与的任何偶联,应在偶联进行前除去。偶联后,抗体可保存于叠氮化钠中,除此之外,0.01%硫汞撒(硫柳汞)不含伯胺,也是可接受的替代物。

    叠氮化钠可通过透析或凝胶过滤从抗体溶液中除去。IgG的分子量为150000道尔顿(IgM为约600000);叠氮化钠的分子量为65道尔顿。截留分子量为14000道尔顿的微透析装置可保留抗体同时使叠氮化物向外扩散。在保持于4℃的磁性搅拌器上的烧杯中,每毫升抗体使用至少一升冷PBS并搅拌透析装置6小时。更换PBS两次,每次更换搅拌至少6小时。如有可能,所有材料都应灭菌并且所得的制备物应无菌操作。

     

    冷冻/融化损伤

    • 重复冷冻/融化循环可使抗体变性,导致其形成使抗体结合能力降低的聚集物。
    • 保存于-20℃对于大多数抗体是适当的;保存于-80℃无明显优势。冰箱不能为无霜型。这些冷冻和融化之间的循环(以减少结霜)恰恰是应该避免的。出于相同原因,抗体试剂瓶应置于具有最小温度波动的冰箱区域,例如朝冰箱后部放置而不是置于门架上。
    • 有些研究人员加入冷冻保护剂甘油达到50%的终浓度以防止冷冻/融化损伤;甘油可将凝固点降低至低于-20℃。虽然这对于很多抗体是可接受的,但是只有一小部分我们提供的抗体测试了在该保存条件下的稳定性,并且我们的保证仅使用于按数据表上推荐的方式保存的抗体。不建议将包含甘油的溶液保存于-80℃,因为该温度低于甘油的凝固点。请注意甘油可被细菌污染。如果加入甘油或任何冷冻保护剂,则应当小心操作,以得到无菌制备物。
    • 应避免抗体在稀释至工作浓度后在4℃下保存超过一天。蛋白质在高浓度下保存时一般不易降解,理想的浓度为1mg/ml或更高。这是在抗体溶液中加入蛋白质例如BSA作为稳定剂的理论基础。加入的蛋白质也有助于减少抗体因结合于容器壁上而造成的损失。对于打算进行偶联的抗体而言,由于稳定蛋白质会与抗体竞争,降低了偶联的效率,所以不应加入稳定蛋白质。
    分享到:
    返回
    本溪瞧擞电子科技有限公司